1858年位于Georgetown的培根学院改名为Kentucky University,迁至Harrodsburg,但不久在南北战争中毁于战火。1865年校园被毁的Kentucky University与财政遇到困难的特兰西瓦尼亚大学合并,校名仍然为Kentucky Univeristy,校园则迁至特兰西瓦尼亚大学所在的莱克星顿。在Morrill政府特许地学院法案的资助下(该法案规定每个州可以从联邦政府得到30000英亩的土地,用于建立教授军事,工程与农学的学院),肯塔基大学农业和机械学院成立。1869年该学院授予第一个学位,同年詹姆斯·肯尼迪·佩特森出任校长。1878年由于指导思想不和,学校分裂,一部分保留Kentucky University的名字,后来改回原名特兰西瓦尼亚大学,另一部分于1879年改名为肯塔基农业和机械学院,莱克星顿市为其提供额外资助,并捐赠了52英亩的土地(肯塔基大学校园的中心部分),即今肯塔基大学的前身。 1880年学校开设师范学院,开始招收女学生,但女生没有获得学位的资格。1888年才第一次授予女性学位。1904年第一座女生宿舍楼Patterson Hall建成,这也是中心校园之外的第一座建筑。住在这里的学生需要穿越一片积水的湿地(即学生活动中心)才能到教室上课。Patterson Hall后被翻新,成为肯塔基大学现存最老的学生宿舍。 1908年学校改名为州立肯塔基大学。1910年担任四十年校长职务的James Kennedy Patterson退休。1916年学校改名为肯塔基大学。1949年黑人学生Lyman T. Johnson胜诉,得以进入研究生院就读。1954年起肯塔基大学废除对学生入学的种族要求。